化橘红饮片炮制工艺及质量标准研究

来学习《化橘红饮片炮制工艺及质量标准研究》的学术成果，为什么化橘红需要炮制？

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目的: 通过对化橘红炮制工艺(软化工艺,干燥工艺),饮片质量标准进行研究,初步制定化橘红饮片规范的炮制工艺及质量标准,为化橘红及其制品用药标准化,质量控制提供了科学依据;

通过对化橘红饮片指纹图谱研究,初步建立其特征指纹图谱,为化橘红的质控与评价引入新的技术方法;

通过对化橘红炮制前后药效变化的研究,为探讨化橘红炮制机理奠定基础. 

方法: 

采用UV法测定总黄酮含量;采用UPLC法测定柚皮苷,野漆树苷含量:采用HPLC法进行指纹图谱研究;

采用小鼠氨水引咳法,DPPH法,邻苯三酚自氧化法和水杨酸法进行药效研究;

分别采用响应面法和正交设计,优化化橘红饮片的软化工艺和干燥工艺;

按《中国药版》2010版一部附录中的方法测定饮片的水分,灰分,浸出物和挥发油. 

成果: 

1化橘红软化工艺的研究 实验选取减压水润法,蒸汽温润法,闷润法三种软化方法.

根据文献中的软化方法和预实验得出三中软化方法的具体操作方式.

以总黄酮,柚皮苷,野漆树苷和挥发油为考察指标,通过综合评分优选出化橘红的最佳软化方法,总评分计算结果显示:

蒸汽温润法减压水润法闷润法药材,蒸汽温润与减压水润接近,但蒸汽温润法相对减压水润法具有简洁,省时,水溶性成分流失较小的优点,所以实验选择蒸汽温润法为最佳软化方法.

采用响应面法对蒸汽温润法进行工艺参数优化,由响应面软件分析得出,化橘红软化工艺的最佳工艺参数为"采用蒸汽温润法,蒸制时间为8h,蒸制温度为50℃".

经过验证实验得出,化橘红样品通过优选出的方法软化处理过后,得出的结果相对药典法(闷润)指标成分含量提高明显,该软化方法实用,可行. 

2化橘红干燥工艺研究 实验选取恒温干燥法,真空干燥法,微波干燥法三种方法进行实验,通过多指标综合评价优选得出较优方法为真空干燥和微波干燥,二者相差甚微,但考虑到微波干燥法速度快,时间短,热效率高,产品质量好,外形美观等优点.

所以,实验选择微波干燥为其最佳干燥方法.

通过正交实验设计对微波干燥工艺技术参数进行优化实验,实验结果表明,最佳干燥工艺参数为药材量(30g),时间(12min),微波光波功率比为49%:51%.

验证试验表明,化橘红样品通过微波干燥处理之后,指标成分含量相对药典法(烘干)提高明显,该干燥方法实用,可行. 

3化橘红饮片质量标准的研究 

3.1饮片检查结果化橘红饮片薄层鉴别结果显示化橘红六个品种薄层色谱行为无明显差异;

化橘红饮片20个批次样品含水量范围为7.84%～8.98%,平均含水量为8.46%.

总灰分含量范围为2.50%～4.21%,平均含量为3.51%;酸不溶性灰分含量在0.03%～0.23%之间,平均含量为0.10%,不同品种化橘红饮片酸不溶性灰分相差较大.

3.2浸出物含量20批化橘红饮片样品浸出物含量测定结果显示,水溶性浸出物(热浸法)含量在35.47%～51.27%之间,平均含量为44.59%;乙醇浸出物(热浸法)含量在19.68%～29.48%之间,平均含量为24.67%. 

3.3指标成分测定20批化橘红饮片样品测定结果显示,不同品种化橘红饮片黄酮类成分含量相差较大;化橘红总黄酮含量在99.77mg/g～264.96mg/g之间;柚皮苷含量在72.13mg/g～205.22mg/g之间;野漆树苷含量在3.18mg/g～17.72mg/g之间,不同品种化橘红饮片柚皮苷占总黄酮的百分比为65.90%～85.91%,野漆树苷占总黄酮的百分比为1.93%～9.94%,各样品的比例相差较大. 

3.4HPLC指纹图谱研究将化橘红6个品种共20批饮片样品指纹图谱进行色谱峰匹配,得到23个共有峰,峰面积较大的峰依次为柚皮苷峰,野漆树苷峰,柚皮素.各饮片样品的HPLC旨纹图谱的外观峰貌十分相似,数据分析显示色谱峰中23个共有峰面积,占总峰面积90%以上,同时指纹图谱相似度极高,基本都大于0.95. 

4化橘红药效学研究 镇咳实验表明:

1,咳嗽时间:除了炮制前低剂量组不能延长小鼠咳嗽潜伏期(P0.05)之外,其余各组均能延长小鼠咳嗽潜伏期(P0.05或P0.01),同是低剂量组,炮制前后没显著差异(P0.05),同是高剂量组,炮制前后有显著差异(P0.05),炮制(蒸制)后的样品使小鼠咳嗽时间延长57.6%;

2,咳嗽次数:化橘红无论炮制与否均能减少2min内小鼠的咳嗽次数(P0.01),炮制(蒸制)后,低剂量组的咳嗽率减少27.4%,高剂量组的咳嗽率减少46.5%,均具有显著性差异(P0.05). 

抗氧化实验表明,样品总黄酮含量越高,抗氧化能力越强,化橘红经过炮制(蒸制)后,与炮制前相比,总黄酮含量增高,抗氧化能力增强.且毛橘红总黄酮含量高于光橘红,抗氧化能力强于光橘红. 

结论: 

1通过响应面设计,多指标综合评价得出化橘红最佳软化工艺条件:采用蒸汽温润法,温度50℃下蒸制8h. 

2通过正交实验设计,多指标综合评价拟出化橘红干燥的优化工艺条件:采用微波干燥法,取化橘红样品30g,微波光波功率比为49%:51%,干燥12min. 

3根据实验结果,初步拟定化橘红饮片质量标准:化橘红饮片水分不得过10.0%:总灰分含量不得过5.0%;酸不溶性灰分量不得过0.3%;水溶性浸出物(热浸法)含量不得少于32.0%;乙醇浸出物(热浸法)不得少于18.0%;按干燥品计算,总黄酮(以柚皮苷计)含量不得少于9.0%;柚皮苷含量不得少于6.5%;野漆树苷含量不得少于0.3%. 

4初步建立化橘红饮片的HPLC指纹图谱所测样品相似度分析基本大于0.95,23个共有峰面积占总峰面积90%以上,可利用其共有模式初步建立化橘红饮片特征指纹图谱,有助于化橘红饮片的生产向现代化,标准化方向发展. 

5化橘红经过炮制(蒸制)之后,无论是镇咳作用和抗氧化能力都得到了显著提高,且与其黄酮类成分的变化存在正相关,可为化橘红临床用药的准确,有效及化橘红饮片炮制机理的阐明提供实验依据.

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总结：

化橘红最佳软化方法是蒸汽温润法，最佳干燥法是微波烘干。炮制之后的化橘红效果更佳好。